牛血清是重要的細(xì)胞培養(yǎng)添加成分，具有終止胰蛋白酶消化，提供細(xì)胞生長所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其他營養(yǎng)物質(zhì)的作用。

根據(jù)采血時間的不同，牛血清通常分為：

• 胎牛血清（采自5-8月胎齡）

• 新生牛血清（采自出生0-7天內(nèi)，也有說法是0-30天內(nèi)）

• 小牛血清（采自出生30天-1年）

• 成牛血清（采自成牛）

理論上，優(yōu)質(zhì)的胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清， 與新生牛和小牛血清相比，各類生長因子含量更為豐富，且由于5-8月胎牛沒有形成完整的補體系統(tǒng)，因此在使用的時候無需熱滅活。

但是由于胎牛血清價格相對而言會更高一些，不同實驗對于血清的需求也不同，因此，如何挑選適合自己實驗的血清就顯得尤為重要。總的原則就是，綜合考慮各實驗室、生產(chǎn)企業(yè)的條件與所培養(yǎng)細(xì)胞類型。除了以往根據(jù)經(jīng)驗和文獻報道，必要時也可進行針對特定細(xì)胞的血清篩選試驗，以篩選出最佳血清。

今天我們來分享一篇國內(nèi)研究人員發(fā)表在《生物學(xué)雜志》上的標(biāo)題為《不同類型牛血清對MDCK細(xì)胞培養(yǎng)效果研究》的文獻，該研究對進口胎牛血清、國產(chǎn)胎牛血清、國產(chǎn)新生牛血清在MDCK 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的促生長效果進行了闡述。

文獻報道

研究方法

作者在含10%不同類型牛血清的DMEM 培養(yǎng)液中連續(xù)傳代培養(yǎng)MDCK 細(xì)胞，比較了三種血清培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的傳代穩(wěn)定性、最大増殖密度、倍增時間、比生長速率、貼壁率等指標(biāo)。

1、貼壁培養(yǎng)傳代穩(wěn)定性觀察

分別用含有10%A、B、C血清的DMEM培養(yǎng)基復(fù)蘇MDCK工作庫細(xì)胞，待細(xì)胞生長至致密單層時，分別用含有3種類型血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)并連續(xù)傳代10代，傳代時細(xì)胞均按照1∶6比例，置于5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中。每代細(xì)胞在24和48 h拍照觀察細(xì)胞形態(tài)、長勢及致密程度。

2、生長曲線及生長動力學(xué)分析

取第4代3種類型血清培養(yǎng)生長狀態(tài)良好且鋪滿單層的MDCK細(xì)胞，計數(shù)稀釋至1×10^4 個/mL，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接1 mL細(xì)胞懸液。將24孔細(xì)胞培養(yǎng)板放置5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，每24 h消化3孔計數(shù)，計算平均值。按照此方法，對培養(yǎng)至第6代、第9代的MDCK細(xì)胞重復(fù)該試驗2次，計算3次平均值,繪制細(xì)胞生長曲線。并比較3種類型血清培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的最大増殖密度、倍增時間、比生長速率和平均比生長速率。

3、貼壁率分析

取第4代、第6代和第9代3種類型血清培養(yǎng)生長狀態(tài)良好且鋪滿單層的MDCK細(xì)胞，按1.2.1所述方法將細(xì)胞稀釋至1×10^3個/mL，制成50 cells/4 mL的細(xì)胞懸液，在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入4 mL的細(xì)胞懸液，并做平行3孔。將6孔細(xì)胞培養(yǎng)板放置5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8 d，出現(xiàn)集落后，用吸管吸去培養(yǎng)液，用PBS清洗，無水甲醇固定，結(jié)晶紫染色。觀察并對細(xì)胞集落計數(shù),計算平均值。

4、細(xì)胞工廠擴大培養(yǎng)驗證

取第10代C血清培養(yǎng)生長狀態(tài)良好且鋪滿單層的MDCK細(xì)胞，消化后計數(shù)，擴大培養(yǎng)至1層細(xì)胞工廠連續(xù)傳3代，加150 mL細(xì)胞培養(yǎng)液,接種密度為(8～9)×10^4 個/mL，置5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱，用上述方法，接種10層細(xì)胞工廠，加1.5 L細(xì)胞培養(yǎng)液,接種密度為(8～9)×10^4個/mL，每12 h用細(xì)胞工廠觀察臺觀察,待細(xì)胞長成致密單層后，繼續(xù)傳代培養(yǎng)3代，觀察細(xì)胞生長情況并在長成致密單層時消化計數(shù)。

實驗結(jié)果

• 在最大增殖密度和倍增時間上，胎牛血清均優(yōu)于新生牛血清。

• 在貼壁率方面［貼壁率(% ) = (所形成集落數(shù)/ 接種細(xì)胞數(shù)) ×100%］，進口胎牛血清略高于國產(chǎn)胎牛血清，差異顯著；國產(chǎn)新生牛血清低于國產(chǎn)和進口胎牛血清，差異極顯著。

總結(jié)

對于生產(chǎn)或研究所用的培養(yǎng)細(xì)胞，大多數(shù)情況下，生產(chǎn)或研究人員可以依據(jù)以往經(jīng)驗以及文獻報道選擇合適的血清。在個別不確定的情況下，也可參考以上文章的方法進行最適血清的篩選。

參考文獻：

[1]李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李倬,喬自林,馬忠仁.不同類型牛血清對MDCK細(xì)胞培養(yǎng)效果研究[J].生物學(xué)雜志,2020,37(04):21-25.

點擊文末閱讀原文，即可抵達相關(guān)文獻處。

好物推薦

Ausbian進口特級胎牛血清（澳洲血源），優(yōu)勢：

1、精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細(xì)胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2、新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3、每個批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細(xì)胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4、每年按廠家生產(chǎn)順序，會有多批次平行供應(yīng)，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5、為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面，提供更多免費延伸性技術(shù)幫助。）

6、針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7、為Ausbian血清提供免費代儲存服務(wù)，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8、Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復(fù)凍融。

9、免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標(biāo)簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10、免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內(nèi)，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11、免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗，為各種細(xì)胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考