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干貨分享:細胞轉(zhuǎn)染全攻略(上)

更新時間:2022-05-30  |  點擊率:805

 

定義:細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。

分類:

按轉(zhuǎn)染途徑可分為:細胞轉(zhuǎn)染分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。

按轉(zhuǎn)染結(jié)果可分為:瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

應(yīng)用:在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中。

總結(jié):轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。

不同轉(zhuǎn)染途徑的比較

1.物理介導(dǎo):電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?/span>

2.化學(xué)介導(dǎo):方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。

3.生物介導(dǎo):方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

理論上,理想的細胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),目前看來,雖然轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性低,但整個過程比較復(fù)雜復(fù)雜,常常對細胞類型有很強的選擇性。

因此,無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),想要獲得*優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果,都需要對轉(zhuǎn)染條件進行一定的優(yōu)化。

影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,從細胞類型、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài),到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié),都需要考慮。

三種轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)劣都給大家準備好了,有需要的同學(xué)可以截圖保存。

 

 

 

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不同轉(zhuǎn)染結(jié)果的比較

瞬時轉(zhuǎn)染(transient transfection)

外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24~72h小時內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)和熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(Stable transfected)

外源DNA既可以整合到宿主細胞中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記。如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:

  • 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

  • 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

  • 參與細胞凍存。

  • ......

一款優(yōu)質(zhì)的血清,能成為細胞實驗的“*輔助”。

Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有*優(yōu)勢:

 

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