根據(jù)我國的食品安全標(biāo)準(zhǔn),對嬰兒配方食品需測定葉酸含量,以保證在正常范圍。具體測定以微生物培養(yǎng)法為選擇。小編現(xiàn)將具體過程拆解如下,以資感興趣人士參考。
所需儀器有天平、培養(yǎng)箱、離心機(jī)(需能放置試管)、超聲波振蕩器、pH計(jì)、分光光度計(jì)、渦旋振蕩器等。所需培養(yǎng)基有維持培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基和測定培養(yǎng)基,可購買商品化產(chǎn)品(建議進(jìn)口產(chǎn)品,以保證質(zhì)量),以節(jié)省人力和時(shí)間。培養(yǎng)基干粉需按產(chǎn)品說明制備和滅菌,放置在10℃以下密閉容器中保存。
樣本制備,可直接稱量0.1至0.5g,至小數(shù)點(diǎn)后三位,轉(zhuǎn)入100ml錐形瓶中。用80ml氫氧化鈉乙醇溶液溶解,超聲震蕩2-4小時(shí),加水定容。對樣本液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,使樣本葉酸含量在0.2ng/ml~0.6ng/ml中。
再取3支試管(所用試管需嚴(yán)格鹽酸浸泡和高溫烘干消毒),分別加入0.5、1.0、2.0ml稀釋后的樣本,補(bǔ)水至5ml。再加入5ml葉酸測定用培養(yǎng)液,混勻。
制備葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。先制備儲(chǔ)存液(20μg/ml),即稱取20mg標(biāo)準(zhǔn)品,用氫氧化鈉溶液在1000ml容量瓶中溶解定容,再用分光光度法進(jìn)行濃度標(biāo)定。儲(chǔ)存液可在棕色瓶中4℃儲(chǔ)存2年。用儲(chǔ)存液可配置中間液(0.2μg/ml)和工作液(0.2ng/ml)。再配濃度梯度工作液,使葉酸量從0ng, 0.05ng, 0.1ng,0.2ng遞增至1ng(先補(bǔ)水5ml,再加5ml葉酸測定用培養(yǎng)液)。再高壓滅菌15分鐘。
測定時(shí),向每支測定管加入20μl接種液,塞好棉塞,37℃培養(yǎng)20-40小時(shí),直至獲得zui大渾濁度。
那么,接種菌液如何制備,zui后如何用分光光度計(jì)檢測和分析結(jié)果呢?小編下次為您拆解。
葉酸干酪培養(yǎng)基(即葉酸測定培養(yǎng)液)可向北京締一生物購買,該產(chǎn)品為培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia公司生產(chǎn)。其工藝及產(chǎn)品質(zhì)量均通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP、CE和FDA認(rèn)證,質(zhì)量可靠,性能,產(chǎn)品行銷140多個(gè)國家。
北京締一生物科技有限公司,作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。