內(nèi)毒素(Endotoxin)即革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖成分,菌體死亡崩解后釋放出來。它又稱熱原質(zhì),會(huì)給機(jī)體帶來一系列的不良反應(yīng),因此對(duì)生物制品需要進(jìn)行內(nèi)毒素測(cè)定。本文締一生物/締一生物為您分析內(nèi)毒素是怎么檢測(cè)的?
內(nèi)毒素檢測(cè)要用到一種鱟試劑。鱟是一種海洋節(jié)肢動(dòng)物,形似蟹,身體呈青褐色,包被硬質(zhì)甲殼。鱟的血液是淡藍(lán)色的,一遇到細(xì)菌就會(huì)凝固。人們利用這一特點(diǎn)開發(fā)出鱟試劑,即將鱟血液中的變形細(xì)胞進(jìn)行溶解,將溶解物制成的無菌冷凍干燥品。這里面含有能被微量?jī)?nèi)毒素激活的凝固酶原,從而產(chǎn)生渾濁效應(yīng)。
常見內(nèi)毒素方法有凝膠法、濁度法和顯色法。濁度法是根據(jù)濁度變化而測(cè)定內(nèi)毒素含量,顯色法是利用凝固酶的特定底物顯色來測(cè)定內(nèi)毒素含量,這兩種方法可以定量。凝膠法是根據(jù)鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生的凝集反應(yīng)來定性或半定量?jī)?nèi)毒素的方法。凝固酶能使凝固蛋白原產(chǎn)生凝膠,可肉眼觀察,不用特殊的儀器設(shè)備。
檢測(cè)時(shí),要注意鱟試劑的靈敏度,不同鱟試劑的靈敏度不同。一般要采用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行鱟試劑靈敏度的復(fù)核。確定供試品zui大有效稀釋倍數(shù)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)器具也都要保證已去除熱原。
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